Técnica de Stoll

Técnica de Stoll

(Técnica de Cuenta de huevos en las heces)

Fundamento:

Cundo se identifica un parasito es necesario que se determine la intensidad en la cual se encuentra este, la mayoría de esta parasitosis es asintomática, pero se correlaciona con la expulsión de huevecillos de helmintos al día; se puede hacer una relación de la cantidad de parásitos que habitan con la cantidad de huevecillos en cierta cantidad conocida de heces. En los resultados también influye la forma de vida así como la mala alimentación y digestión, dieta, la producción de huevos y la consistencia de las heces.

Para unos mejores resultados en las muestras es necesario realizarlo en una serie de varios días y hacer las cuentas, así es como se determina aproximadamente la expulsión de los huevecillos.

Objetivo:

Los alumnos aprenderán a identificar algunos huevecillos de helmintos que viven o parasitan en su intestino mediante una técnica cuantitativa.

Material y reactivos:

*Probeta de 15ml                                  *Hidróxido de sodio                                                                      *abatelenguas                                                                                                                                                      *Aplicador                                                                                                                                                   *Cuentas de vidrio                                                                                                                                      *Portaobjetos                                                                                                                                   *Cubreobjetos

                                        

Procedimiento:

1.- Se llena la probeta a 5.6 ml con el hidróxido de sodio

                                  

2.- Con el aplicador se agrega una pequeña cantidad de heces hasta que se eleve el hidróxido a 6ml

                                        

3.- Después se añaden las diez cuentas de vidrio, en este caso fueron cinco, se tapa y se agita hasta que las heces estén desmoronadas y bien mezcladas con el NaOH.

4.- Cuando ya estén disueltas por completo, se vuelve a agitar el tubo durante un minuto y se toma de la muestra cierta cantidad esta se coloca en el portaobjetos y después se coloca el cubreobjetos.

                                      

5.- Se pone la muestra al microscopio en el objetivo de 40x y se observa si hay huevecillos, de ser así se hace la parte cuantitativa.

                        

6.- Cuando se efectúa la cuenta se realizan dos partes separadas de acolitas de la suspensión.

Observaciones:

En la muestra realizada no se logró ver algún huevecillo ya que solo logramos observar restos de fibra no digerida o parcialmente digerida.

                            

Comentario: Aunque no logramos ver huevecillos en la muestra, hubiese sido muy bueno realizar cálculos para saber cuántos huevecillos y de que especies tenemos en el intestino.

Datos:

Hembra de la especie Necátor: 7000 huevos al día

“                               “Áscaris: 200000 huevos al día

“                               “Trichuris: 7500 huevos al día

Calculo:

1.- Se cuentan los huevos en determinado volumen, el número total de estos en 1ml se encuentran al multiplicar la cuenta total por 100.

2.-Suponiendo que el promedio de una  persona rebasa los 100 gr de heces por día, es posible calcular el número de huevos al día multiplicando el resultado por 100

3.- Para determinar el número de parásitos hembras presentes, se divide el número diario de huevecillos que hay en las heces entre el promedio de las hembras que ya se dieron.

Conclusión:

Se aprendió a realizar otra técnica que nos permitió hacer un método cuantitativo para determinar el número de huevecillos que viven dentro de nosotros.

 Alumna: Rubi Joseline Castillo Juarez  3DM

Método de concentración por flotación de Willis

Método de concentración por flotación de Willis

Objetivo:

Los alumnos aprenderán a identificar algunos parásitos, quistes y huevos ya que el método que a continuación se realizará  nos permitirá detectar primordialmente huevos livianos (ancilostomideos).

Introducción:

 Este método es recomendado esencialmente para la investigación y detección de helmintos. Este consiste primordialmente en mezclar la materia fecal con solución saturada de NaCl; los helmintos que tienen menor peso que la solución saturada subirán a la superficie y se adherirán al cubreobjetos, para esto el tubo de ensaye tiene que estar muy lleno.

Material y Reactivos:

-vaso de precipitados                                 -solución saturada de NaCl                     - embudo                    -yodo-lugol                                                                                                  -gasa                                                                                                                                                     -tubo de ensaye                                                                                                                      -portaobjetos                                                                                                                                               -cubreobjetos 

Procedimiento:

1.- se toma aproximadamente 1 gramo de la materia fecal.

2.- colocar la muestra en el vaso de precipitados  y mezclar con 10 ml. De solución saturada de NaCl.

3.- en un tubo de ensaye se coloca la mezcla filtrando con la ayuda de la gasa y el embudo, tratando de llenar el tubo completamente.

4.- se coloca un cubreobjetos en la superficie del tubo  de manera que la mezcla haga contacto con el cubre.

5.-Esperar de 5 a 10 min.

6.-En ese lapso, los huevos de helmintos, cuyo peso específico es menor que el de la solución, flotaran y quedaran adheridos a la cara del cubreobjetos en contacto con la mezcla.

7.- Colocar una gota de yodo-lugol sobre un portaobjetos, retirar el cubreobjetos con mucho  cuidado para evitar la pérdida del material y ponerlo sobre el portaobjetos.

8.-Examinar al microscopio con el objetivo 40x, buscando quistes o huevecillos de parásitos

Resultados:

En la muestra que se analizó pudimos encontrar algunos quistes y según su morfología encontrada se puede decir que son de ENTAMOEBA HISTOLYTICA Bueno en mi opinión así lo es.

 En esta Foto se puede observar                        En esta se hace una comparación                                                                                                                                       un  un quiste aprox. A las 5:00                                   con el quiste de E. histolytica.

Conclusión:

Este método es de alta sensibilidad en el diagnóstico de huevos livianos de helmintos. Pero no es indicado para la búsqueda de huevos pesados ni de larvas.

  

Método de concentración por sedimentación RITCHIE

Método de concentración por sedimentación RITCHIE

OBJETIVO:

El alumno aprenderá a realizar un método por el cual le será más fácil encontrar parásitos, y utilizara algunos objetos y sustancias que ya conoce y sabe manejar. A sí que de esta manera realizara el método de RITCHIE el cual consistirá en centrifugación, decantación, mezclar con varias sustancias, y observar al microscopio.

FUNDAMENTO:

Este método se basa en la concentración de los quistes y huevos por sedimentación mediante la centrifugación, se necesitaran de algunas sustancias como: éter, formaldehido, y sol salina; que respectivamente nos ayudaran a encontrar los parásitos en las heces.

Este método (RITCHIE) nos proporciona una ventaja muy importante ya que no deforma a los parásitos, y permite el transporte y almacenamiento de la materia fecal procesada antes de ser examinada, esta técnica nos resulta más conveniente en casos de tratamiento o de cierta frecuencia, ya que por el procedimiento que a continuación se realiza es más probable encontrar alguna forma de vida parasitaria.

MATERIAL Y EQUIPO:                                      SUSTANCIAS:

-centrifuga

-tubos de ensaye cónicos                                    -sol. Salina isotónica

-gasa cortada en cuadros                                     -sol. De formaldehido al 10%

-embudos de polietileno                                       -éter

-vasos de precipitados de 50 ml.                         -heces fecales

-aplicadores de madera                                     -yodo lugol   

-pipetas Pasteur con bulbo

-portaobjetos

-cubreobjetos

-microscopio

          

METODO:

a) Con el aplicador de madera se coloca aproximadamente 1 gr. De la materia fecal en el vaso de precipitados, se añaden 10 ml de solución salina y se homogeniza

b)   Se filtra la suspensión a través de la gasa colocada en el embudo recogiendo el filtrado en el tubo cónico.

c)    Se centrifuga la suspensión durante 2 min. a 2000 r.p.m

d)    Se decanta el sobrenadante y se resuspende el sedimento con la solución salina, centrifugando, decantando y resuspendiendo 2 veces más

               

e)   Al último sedimento se agregan 5 ml. De sol. De formaldehido al 10%, se mezcla y se deja reposar durante 10 min.

f)   Se añaden después 0.5 ml. De éter, se tapan los tubos y se agitan energéticamente durante 30 seg.

g)     Se centrifuga durante 2 min. a 2000 r.p.m.

Quistes de entamoeba histolytica

COMENTARIO:

Claro ese fue el resultado para mí ya que es muy parecido y casi en el centro de la primera imagen se puede observar un quiste con aproximadamente 2 o 3 núcleos dentro, y en la segunda imagen hice mi comparación es por eso que mi resultado es ese.

Conclusión:

Al hacer mi comparación yo deduzco que es ENTAMOEBA HISTOLYTICA ya que en este solo se encuentran quistes con 4 núcleos por mucho y en la muestra se observan 3; se aprendió a realizar el método y a identificar quistes y algunos parásitos.

FUENTE DE INFORMACION:

-texto redactado por Q.F.B. Amalia Briones Amador.

- no se sugirió alguna pág. De internet.

Datos:

Alumna: Rubi Joseline Castillo Juárez Grado y grupo: 3”DM” Especialidad: Laboratorista clínico

Profe: Dr. Vicente Martínez Fragoso

          

            

h)    Después de centrifugar se observan 4 capas ( aunque en nuestra muestra no se observaron muy bien estas capas):

>éter en la superficial

>un tapón de restos fecales

>formaldehido

>sedimento en el fondo del tubo, conteniendo los elementos parasitarios.

i) se decanta el sobrenadante.

j) Se introduce la pipeta Pasteur hasta el sedimento, se extrae con cuidado una gota del sedimento y se coloca en el portaobjetos.

 k) Se le añade una gota de lugol y se le coloca el cubreobjetos.

l) Se observa la preparación en el microscopio con los objetivos 10x y 40x.

RESULTADOS:

Al observar al microscopio en el objetivo 10x se identificaron algunos quistes pero en el objetivo 40x no se lograron observar mejor. Se compararon y el resultado fue:      

  

"C.P.S" Tecnica de faust

CBTis 199

Nombre: Rubi Joseline Castillo Juárez

Materia: Desarrollar técnicas parasitológicas

Profe: Dr. Vicente Martinez Fragoso

Especialidad: Laboratorista clínico

Grado y grupo: 3DM

                          “C.P.S. TÉCNICA DE FAUST”

FUNDAMENTO:

 En este método se utiliza solución de Zn, cuya densidad especifica es de 1.180 (33%), que conforma un medio de densidad más alta que la de los huevos: Necator 1.055, Tricocéfalo 1.150, Áscaris fértil 1.110 y facilita que los huevos livianos de estos helmintos, con menor peso específico que la solución, se concentren y floten.

La concentración adecuada aconsejada es la que usa como reactivo una solución acuosa de sulfato Zn al 33% con una densidad al 1.180. El agua utilizada diluye y lava la materia fecal. El filtrado con gasa doblada y evita que los detritos gruesos traspasen las paredes, la centrifugación enriquece en delgada película la superficie del líquido centrifugado con los huevos livianos de algunos helmintos.

MATERIAL:

         -Portaobjetos                                               -Sol. Acuosa de sulfato de Zn

            -Cubreobjetos                                             -Heces fecales

            -Gasas                                                          -Embudo pequeño

            -Tubos de ensayo                                      -Vaso de precipitados

                         

TÉCNICA:

1.-Mezclar bien una porción de materia fecal para preparar una superficie en 10 partes de agua destilada.

                           

2.-Filtrar la suspensión a través de una gasa doblada en 4, sobre un tubo de centrifuga, ayudándose con un embudo pequeño.

  

3.-Centrifugar el filtrado a 2500 rpm por un min.

                                   

4.-Decantar el líquido sobrenadante y completar con agua hasta igualar la medida anterior, centrifugar nuevamente. Resuspender el sedimento.

                               

5.-Repetir el procedimiento 2 veces hasta que el líquido sobrenadante este listo.

6.-Decantar nuevamente el líquido sobrenadante reemplazándolo por igual cantidad de solución de sulfato de Zn al 33%. Mesclar bien la solución con el sedimento. Centrifugar durante 1 min a 1500 rpm.

                      

7.-Tomar 3-4 gotas de las partículas que flotan en la superficie del líquido. Colocarlos en un portaobjetos y mezclarla con 1-2 gotas de lugol; colocar el cubreobjetos.

8.-Examinar al microscopio y reportar sus resultados.

                                        

              

 OBSERVACIONES: 

Al ver la muestra en el microscopio pudimos observar que sólo había residuos órganicos  como fibras y tejido conectivo pero ningun parásito comop se esperaba.

COMENTARIO:

A mi punto de vista en las heces fecales no logre identificar parásitos sólo algunos residuos de comida asi como algunas fibras, tejido, y  unos cuantos restos de cristales grasos. Pero todavia no puedo identificar muy bien lo s parásitos sólo se que algunos son comensales del intestino.  

CONCLUSION:

Método indicado para el diagnóstico de huevos livianos de helmintos (Necator, tricocefalos, ascaris, H.nana).     

Viva Ya se COmO pUBlIcAR eN blogg !!!Viva!!!!